空质粒ppiczA电转GS115后PCR筛选遇难题

wsgcc

发表于 2005-11-17

空质粒ppiczA电转化GS115后,长出菌落不少。但是PCR筛选时每个菌落都只有300多bp的片段,未见2.2kb的片段。目前已经筛选了28个菌落均如此。我用的是5-AOX1和3-AOX1引物(因为载体无阿而发分泌信号,说明书上说应该有2条带)。我想有300多bp的片段出现,说明酵母细胞已经破碎(用的溶细胞酶),奇怪的是2.2KB的条带去哪里了?是PCR假阴性呢,还是菌落都是假阴性呢?唉!本来准备筛选出来好好过五一,看来计划赶不上变化了。各位老师,请帮帮我吧!不胜感激!

网友评论

延伸时间够吗?1KB要一分钟。

发表于 2019-02-23

我用的是2分钟。

发表于 2019-02-23

According the vector pPICZA map, the two primers you used can get a 304 bp, not 2.2 kb, PCR product by using the vector pPICZA alone (no insert). 5'AOX is starting from 855- 875, and 3'AOX is form 1159-1179. Therefore, I think your clones are true ones.

发表于 2019-02-23

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