一批转基因小鼠要通过PCR检测,之前是阳性结果后来无法重现

samzhang

发表于 2004-07-03

各位高手,大家好! 小弟有一关于PCR的问题,想向大家请教,先谢谢大家了。 我有一批转基因小鼠要通过PCR检测,前一个月已做过一批,效果不错。但现在再做另一批转入同样基因的小鼠,却做不出来了。PCR体系,条件都和前次一样,包括上次做是阳性的现在也不行了,还请各位不吝赐教。谢谢!

网友评论

按照李卫在侦破考场风波中的经验,我觉得你出现的问题不外乎下面几种:(1)第一批有问题,你能排除吗,如PCR污染
(2)你的DNA没提好,或者你的DNA根本没提出来,这你能排除吗
(3)你的PCR体系你确信没有问题吗,如你是不是漏加那种试剂呢,还有你能确信你的PCR程序跟上次是一样的吗
(4)不知道你的引物特异性怎样?
建议你在这些方面找找原因,希望对你有所帮助

发表于 2019-02-23

也有可能是你的Taq酶失活了

发表于 2019-02-23

samzhang
各位高手,大家好!
小弟有一关于PCR的问题,想向大家请教,先谢谢大家了。
我有一批转基因小鼠要通过PCR检测,前一个月已做过一批,效果不错。但现在再做另一批转入同样基因的小鼠,却做不出来了。PCR体系,条件都和前次一样,包括上次做是阳性的现在也不行了,还请各位不吝赐教。谢谢

上次提取好的DNA,上次未提取的标本,本次取样的上一批小鼠标本,同时对照,看结果如何?
上次做是阳性的现在也不行了,是何意思?用的是上面的哪一种标本做的?
设置合理的阳性对照,来得到结果保证!

发表于 2019-02-23

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一批转基因小鼠要通过PCR检测,之前是阳性结果后来无法重现

samzhang

发表于 2004-07-03

各位高手,大家好! 小弟有一关于PCR的问题,想向大家请教,先谢谢大家了。 我有一批转基因小鼠要通过PCR检测,前一个月已做过一批,效果不错。但现在再做另一批转入同样基因的小鼠,却做不出来了。PCR体系,条件都和前次一样,包括上次做是阳性的现在也不行了,还请各位不吝赐教。谢谢!

网友评论

按照李卫在侦破考场风波中的经验,我觉得你出现的问题不外乎下面几种:(1)第一批有问题,你能排除吗,如PCR污染
(2)你的DNA没提好,或者你的DNA根本没提出来,这你能排除吗
(3)你的PCR体系你确信没有问题吗,如你是不是漏加那种试剂呢,还有你能确信你的PCR程序跟上次是一样的吗
(4)不知道你的引物特异性怎样?
建议你在这些方面找找原因,希望对你有所帮助

发表于 2019-02-23

也有可能是你的Taq酶失活了

发表于 2019-02-23

samzhang
各位高手,大家好!
小弟有一关于PCR的问题,想向大家请教,先谢谢大家了。
我有一批转基因小鼠要通过PCR检测,前一个月已做过一批,效果不错。但现在再做另一批转入同样基因的小鼠,却做不出来了。PCR体系,条件都和前次一样,包括上次做是阳性的现在也不行了,还请各位不吝赐教。谢谢

上次提取好的DNA,上次未提取的标本,本次取样的上一批小鼠标本,同时对照,看结果如何?
上次做是阳性的现在也不行了,是何意思?用的是上面的哪一种标本做的?
设置合理的阳性对照,来得到结果保证!

发表于 2019-02-23

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