标签: 质粒转化转化子鉴定
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中,实现重组克隆的增殖,便于后续分子操作(1)用于基因的克隆增殖;(2)筛选目的细胞。
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1、利用氨苄青霉素抗性筛选转化子时,用转化细胞铺平板的密度要低(90mm平板上不得超过105个菌落),同时37℃培养不应超过20小时,具氨苄青霉素抗性的转化体可将-内酰胺酶分泌到培养基中,迅速灭活菌落周围的抗生素,从而导致对氨苄青霉素敏感的卫星菌落的出现。
2、 鉴定转化子中是否含有外源DNA片段常用的方法有:
1) 互补;
2) 杂交筛选;
3) 插入失活(一些老质粒如pBR322等);
4) 小量提取质粒酶切检测、PCR检测
分子生物学
本人实验室最近在做耻垢分枝杆菌的电转,做了都快2个月了,结果一个都没转进去,我用的电转条件是2.5kv,4ms,不知道原因
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