关于attp果蝇显微注射问题

关于attp果蝇显微注射问题

木頭E60Z 2019-05-27 0 评论 128 阅读

使用了Bloomington的2448M{v2和24749两个品系直接做注射,各做三组均无获得转基因果蝇。。。。。。。 24482 y1M{vas-int.Dm}ZH-2Aw*;M{3xP3-RFP.attP'}ZH-51C 。。。 。。。。。 。。 。。 。。。。 24749 y1M{vas-int.Dm}ZH-2Aw*;M{3xP3-RFP.attP'}ZH-86Fb 。。。 然而相同质粒让公司帮忙注射却均获得转基因果蝇,公司的方案是通过Cre/loxP反应切除了原始位点上的3xP3-RFP序列,创建了对应位点的NF (没有RFP) 的果蝇品系及其M{vas-int.Dm}NFZH-2A果蝇品系,对于含有loxP序列的质粒仍然可以在转基因完成后通过Cre/loxP反应切除非必要序列,只保留loxP-目标片段-attL序列。 。。。。。 从网上的相关资料中了解到注射的方法为PhiC31整合系统。 。 。。 原理:PhiC31整合酶介导的定点转基因系统是在果蝇中应用噬菌体PhiC31整合原理建立特定位点的转基因品系的系统。PhiC31整合酶可以识别特异序列attP(噬菌体结合位点)和attB(细菌结合位点),使两段序列之间发生高效且不可逆的整合反应。将含有attB序列和w+ 筛选标记的质粒注射入含attP序列的果蝇品系,在PhiC31整合酶作用下得到稳定的带w+标记的转基因品系,这样目标基因位于attL和attR之间(不可逆反应)。含attP位点的果蝇品系基因组上没有PhiC31整合酶基因,采用M{vas-int.Dm}ZH-2A作为基因组来源。。。。。 根据原理来分析,这个品系的果蝇直接注射就可以获得转基因品系才对。。。 。。。 请问哪个大神可以帮忙解析一下。。。。

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