封闭之后需要用TBST洗吗
简而言之,若封闭及一抗孵育全程均用脱脂奶粉,可以不用洗! 若考虑回收一抗,建议一抗用TBST稀释,这种情况就需要洗了!
如果封闭液和抗体稀释液都是5%的奶粉,封闭之后不用TBST洗。如果封闭液用5%奶粉,抗体稀释液不用奶粉的话,用TBST洗洗
可以洗一下,只是想一抗不容易坏掉,因为牛奶放在4℃容易变质,如果你还想一抗回收再利用几次,建议洗一洗。不过背景有时候可能不好,会变很深!其实我实验过了,没啥差别,个别蛋白孵育一抗背景会变得难看!
我们需要洗,5%奶粉封闭是为了封闭非特异性蛋白,不然结果的背景会深,检测的蛋白不明显
封闭完稍微用TBST泡一下,再放入一抗中
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