Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
我们这边都是室温牛奶封闭1小时,然后一抗封闭4℃过夜
5%~15%的脱脂奶粉,封闭2h
我一般用10% non-fat milk/TBST(w/v)封闭,NC膜封闭10-30 min,PVDF30-60 min,完全没有问题。一抗和二抗都在5% non-fat milk/TBST或者2.5% BSA/TBST中孵育。个人观点,封闭其实并非western关键步骤,我有时候试过5min封闭,或者干脆直接将膜放在一抗中,没有显著性差异。
室温1.5到2个小时,或者四度过夜~
2小时,不需要过夜。
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