一般采用5%牛奶 封闭可以4°封闭过夜也可以室温封闭1-2小时我都试过 没啥区别
室温1个小时就可以了,我一般用1g脱脂奶粉,溶到20ml!
建议过夜,通过4℃孵育过夜延长抗原和抗体的反应时间以获得最好的信噪比是非常关键的。
如果是过夜的话,是4度静置过夜,如果是室温,是室温下摇晃的孵育60分钟 参考资料 http://www.detaibio.com/material-downloads.html
封闭剂有分为脱脂牛奶或是BSA用脱脂牛奶主要是因为一般牛奶中的油脂会影响WB的实验使用脱指牛奶必须注意要将奶粉溶解完全脱指牛奶配好后放在冰箱也不要超过一个星期容易滋生细菌, 最好新鲜配置而脱指牛奶从1%~10%都有人在使用时间上室温1-2个小时或是4度C隔夜主要还是看您第一次封闭后的效果然后再去做调整有任何其他关于抗体实验相关问题也可以随时提问囉 :)