有可能是你的蛋白不新鲜可能时间久了被降解了或者是换用抗体了,一抗或二抗抗体的质量也很重要
亲,会不会是封闭过度了呢?5%mlik可能会比较高,换成3%试试吧,我曾经就有因为封闭过度而导致没有条带
因为影响WB的因素有很多,据你描述我估计问题出在以下几个方面:1.更换转膜液,转膜液是有保质期的,配置好后超过2周使用即可失效,最好使用新鲜配制的转膜液2.转膜的问题,因为你的两个目的条带比较接近,可能是切胶过程中将其切走,marker也存在误差3.抗体孵育的问题,因为是两种蛋白分别孵育,就可能会出现错误,建议一个个来,先做内参。
蛋白降解了?你用的是原标本,还是新收的蛋白?
啊,你不是二抗给孵错了吧?还有就是你用的什么显影方法啊,试剂没有问题吧?要新鲜配置的AB液哦