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  为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致

chengxue727  提问于 2013-02-27

共47个答案

  • 23 0

    dxymuchong 回答于 2018-12-15

    我可以这么理解吗:内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。  

  • 9 0

    200210lee 回答于 2018-12-10

    楼主最好上图,看下条带情况。听口气楼主应该是老手了,基本操作的问题我们没必要去考虑。我认为问题的关键在于成像的过程。同一张膜,本人可以在成像的时候,做出完全不同的图片结果。显色液的滴加,量,以及曝光时间,条带颜色(要求灰色而不是黑色)。所以最好有图片说明问题。  

  • 7 0

    无名冷雨 回答于 2018-12-10

    这个问题我以前在做western blotting的时候也遇见过,楼主说是内参一致,而目的条带每次都不一样,我想说原因可能是在显影液环节,简单来说就是你的膜没有淋干净,上面残留参差不齐的T/TBS,T/TBS能稀释显影液,目的条带本来表达量就少,某一个点残留的T/TBS稍微多一点就可能导致显影效果下降,所以建议在显影液反应前,尽量将膜上的洗膜液淋掉(当然也不能让膜干了,要是实验室富裕的话,也可以多添点显影液,效果一样),希望对你有帮助。  

  • 5 0

    糯米潘 回答于 2018-12-04

    可能涉及几个原因:1,拔梳子时胶错动,加入样本后渗入其他孔或漏出。因为内参表达高,可能不会显示出差异。2,加入样本时不均匀也可能会产生误差。3,制胶应保证均匀无气泡,玻璃板干净,这样才能保证结果一致可靠。
      

  • 3 0

    石丸小北 回答于 2018-12-04

    可不可能你的目的蛋白易分解,掩盖了趋势?  

  • 3 0

    djzgood01 回答于 2018-12-04

    觉得不应该啊?!是不是像ls说的那样电泳液浓度配置、胶浓度不同呢?我们都是配个10*,然后再分装、、、  

  • 3 0

    irise99 回答于 2018-12-04

    根据电泳液浓度配置、胶浓度等均会导致条带不一致,但不会相差太大。  

  • 2 0

    dxy_5o4tpad5 回答于 2018-12-04

    不清楚,不明白。不知道   

  • 2 0

    临涧 回答于 2018-12-04

    就个人经验,虽然用WB做出一张满意的结果涉及多个环节,但向上面你提到的内参没有问题,说明各项操作基本是过关的,据我猜测很可能是最后一步曝光出现的问题,加发光液反应的时间及曝光的时间都会对最后的结果产生影响, 还有一种可能你的发光液的稳定性也许不太好,希望对你有所帮助,哪里说的不对也请多指教.  

  • 2 0

    钟建军 回答于 2018-12-04

    你们上面说的也太大了吧,实际点啊!我建议多加点发光液或者是显色液,然后不要用东西去上面擀,多等一会儿,在荧光最强时甩掉显色液,在压片!  

  • 2 0

    wjx98801 回答于 2018-12-04

    影响因素太多了,我觉得关键1:上样时注意气泡问题,保证上样量一样。2:孵一抗是否均匀  

  • 1 0

    咸蛋超人不会飞 回答于 2018-11-27

    我感觉应该是付抗体不匀,再就是曝光液要加均匀  

  • 1 0

    liannianyouyu82 回答于 2018-11-26

    影响因素比较多的,样品是否反复冻融,加样枪的误差也可能的。  

  • 1 0

    tiantian1987 回答于 2018-11-26

    会不会是移液器不准呢,这样会直接导致上样量不准,使得重现性不好  

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    bingdishui 回答于 2018-11-26

    我觉得可能是上样量的问题,上样量不一致会出现这种情况  

  • 1 0

    dc1121 回答于 2018-11-26

    内参基本是稳定整齐的,这个话本来就不准确了,内参是用来校正的,western过程中很多步骤,从测蛋白浓度,煮蛋白,做胶,上样,电泳,转膜,最后的曝光,曝光液的滴加以及反应时间长短,都会影响到最后的结果。所以western定量的话也只能仁者见仁智者见智了,特别是做不同剂量组的趋势。  

  • 1 0

    liangning1123 回答于 2018-11-26

    也有可能是因为多次一抗孵育导致被被稀释了。  

  • 1 0

    wbjcfx 回答于 2018-11-26

    我是初学者  惭愧啊  马上开始做了  等有了答案再来回答  

  • 1 0

    蓝天飞龙 回答于 2018-11-26

    应该是细节上的问题,上样前蛋白是否混匀,实验中样品有没有置于冰上。

      

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    dxy_0arfeft9 回答于 2018-11-26

    test点击打开链接  

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