为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致

chengxue727

2013-02-27

做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?

38 条评论

dxymuchong

2013-08-21

我可以这么理解吗:内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。

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200210lee

2013-08-19

楼主最好上图,看下条带情况。听口气楼主应该是老手了,基本操作的问题我们没必要去考虑。我认为问题的关键在于成像的过程。同一张膜,本人可以在成像的时候,做出完全不同的图片结果。显色液的滴加,量,以及曝光时间,条带颜色(要求灰色而不是黑色)。所以最好有图片说明问题。

12

无名冷雨

2015-12-25

这个问题我以前在做western blotting的时候也遇见过,楼主说是内参一致,而目的条带每次都不一样,我想说原因可能是在显影液环节,简单来说就是你的膜没有淋干净,上面残留参差不齐的T/TBS,T/TBS能稀释显影液,目的条带本来表达量就少,某一个点残留的T/TBS稍微多一点就可能导致显影效果下降,所以建议在显影液反应前,尽量将膜上的洗膜液淋掉(当然也不能让膜干了,要是实验室富裕的话,也可以多添点显影液,效果一样),希望对你有帮助。

10

糯米潘

2013-08-15

可能涉及几个原因:1,拔梳子时胶错动,加入样本后渗入其他孔或漏出。因为内参表达高,可能不会显示出差异。2,加入样本时不均匀也可能会产生误差。3,制胶应保证均匀无气泡,玻璃板干净,这样才能保证结果一致可靠。

6

石丸小北

2013-10-09

可不可能你的目的蛋白易分解,掩盖了趋势?

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