各位大侠!有几个问题,想帮帮忙! 上面三个图显示的是温度梯度,扩增曲线到达平台期后呈缓慢下降趋势;融解曲线最高峰很尖,不平滑,请问有没有进一步优化的建议?或者说没问题,可以凑活用? 这个图(另一个温度梯度),融解曲线在75-80度之间出现了一个微小的峰,请问这个体系/温度能不能优化?或者可以不优化凑活着用?企盼各位大侠的回复!谢谢!
平台期掉下去也曾遇到过,但是问了好些人都不知道什么原因;融解曲线在75-80度之间出现了一个微小的峰,这个位置这个振幅高度似乎是形成了引物二聚体,也有可能是引物不好,少量的形成了其他条带
平台期有一定下降但不明显,由于模板过多所致。不用考虑引物二聚体的问题,已经在基线以下,没有意义。实在不放心可跑胶看下,但估计没有问题。
注意引物二聚体的优化,还有就是上样量的尝试和优化,选择合适的温度。每次都是这个曲线的话 还是可以的 但是容易不稳定
应该进一步优化,注意引物二聚体
这个结果很好了,不需要优化
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