熔解曲线(Dissociation curve):随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。总的DNA双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度(Tm),不同序列的DNA,Tm值不同。DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系(摘自搜搜百科)白话说来就是因为其中有非特异产物,包含两种以上的DNA序列,所以才有两个峰。当然不排除极度偶然的情况:1.两个序列的熔解曲线一样2.没有目标产物,只有一种非特异产物……
熔解曲线是为了验证扩增产物特异性的,要是熔解曲线是单峰说明产物只有一条,结果较好;要是双峰说明产物不特异,可能存在引物二聚体或非特异性扩增,有可能你的引物设计有问题。
溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况,如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现,这就证明没有非特异性扩增,且初始模板没有被污染;如果出现多个峰,估计是有非特异性扩增了或者初始模板被污染了。更多内容,请访问http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm
看你的熔解曲线峰值在什么温度,如有一个峰值明显很低远小于80,可以考虑是有引物2聚体,可以进一步通过琼脂糖电泳确定,看是否有小于100的条带。如非二聚体,考虑引物是否有非特异产物,或者模板污染等问题。
我想请问一下离80多远就算远小于80 了?