我要检测的mRNA在细胞中丰度很低,每次设计的引物做PCR的手都有非特异性条带,我用的是染料法biorad的ssofast,不知道有没有方法改善特异性。请大家帮帮忙。
现在常用的引物有染料法(sybr green 1)和探针法(taq man探针),taq man探针的特异性非常,但是价格要贵一些,而sybr green 1价格比较便宜,但是会有非特异性扩增,建议试试taq man探针,详细还可参考:http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm
去除非特异性条带又很多方法,引物的特异性算是最重要的,尤其针对Q-PCR,引物要验证,扩增使用具有核酸外切酶活性的热启动Taq聚合酶,热启动型的均可,提高特异性
GC含量高,说明解链温度高,目的条带在较高温度才会解链,而在未达到解链温度时,引物会以未完全解链的DNA为模板,进行PCR非特异性扩增,所以易出现非特异性条带。
可能是引物设计有问题
是不是退火温度太低,所以容易出现非特异性条带。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
Gentier X3 实时荧光定量PCR仪
西安天隆科技有限公司
钻石会员 入驻 16 年
实时荧光定量PCR仪(Turbo 16P)
南京诺唯赞生物科技股份有限公司
金牌会员 入驻 13 年
PikoReal 五通道实时荧光定量PCR仪
赛默飞世尔科技
金牌会员 入驻 17 年
实时荧光定量PCR服务(威斯腾生物-中关村生物医学研发检测共享平台!)
威斯腾生物
金牌会员 入驻 14 年
实时荧光定量PCR(realtime PCR)
武汉爱基百客生物科技有限公司
钻石会员 入驻 9 年
实时荧光定量PCR(RealTime PCR)技术服务
上海研谨生物科技有限公司
钻石会员 入驻 8 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号