我欲克隆的片段很小,其中之一为130 bp ,另外大约70 bp 左右。 PCR检测:用原始扩增引物对, M13forward and reverse primers 、M13 forward primer 和原始扩增引物之一均有扩增产物,但分别用EcoRI 和Not I(这2个酶在easy T载体上存在2切位点)酶切,均无目的条带。 在这种情况下送去测序,会有结果吗?
这种情况下,最好不要送去测序,最好重新做连接。当然这种情况的出现有一种可能是细菌培养时间过长,导致质粒被甲基化修饰所造成的。此时,你只需重新培养细菌,重新提取质粒即可。但这种情况的出现,还有一种可能是PCR假阳性,尤其是在克隆片段较短时会出现。那么这时,你只能重新做连接。建议:干脆重新做连接还比较放心。注意:你的片段比较小,你酶切后的片段浓度能否在电泳后出现带,这一点你一定要弄清,你必须保证浓度酶切片段浓度足以在电泳后可以出现带。否则的话,一切都不能说明问题。
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