如果我的PCR扩增产物浓度不高,在gel上只能显示很微弱的亮带,有什么办法能提高扩增产物的浓度呢?提高DNA模板的浓度?降低退火温度?(似乎会增加产物的非特异性)还有什么别的好办法么?谢谢大家了。
对于克隆所需,你可以多扩增几管,然后合并回收/浓缩。提高产物量建议:1. 如果你没有引物二聚体,建议你提高引物浓度试试。2. 尽量降低退火温度。3. 鉴定用的话可以增加循环数,克隆的话就没必要了(<35),循环数增加突变几率也会增加的。4. 如果你觉得模板浓度太高,可以降低浓度的,太高不好,引物正确配对的机会降低。5. 鉴定用可以考虑重新设计引物的,扩增产物长度不必太长200bp左右就行了。6. 模板质量,DNA抽提不好也会降低扩增效率的。
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