在Genbank上找到了我所需要的目的基因及其启动子序列。根据实验要求,要扩增其启动子序列(5.8Kb)来作为表达载体的驱动。想问下,在做PCR时比较合适的扩增产物片段长度是多少?能不能扩增像5.8Kb这么长的序列?设计引物时有没有什么特别的要求?(在用primer设计引物时,扩增产物长度不同,引物之间的Dimer、错配等不一样)谢谢啦!
没问题,但要注意保真性,也就是用高保真的酶或者采用分段扩增的办法。如有必要有条件,就测序验证。引物设计与你的目的片断长度似乎关系不大,其序列的特异性则是很重要的。有很多常规提高产物特异性的办法,就不一一列举了如果受到模办的局限,不妨采用巢式PCR之类的办法。
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