标签: 组织 切片 免疫荧光 双标记
间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片,同一时间内被显示出来,可用于(1)细胞标记;(2)免疫荧光筛选干细胞。
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1. 当进行双标记实验时,最重要的准则是:第一抗体应为不同类型,从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体,这一要求就有可能达不到,当使用单抗时,不同型的抗体如IgG和IgM,可被第二抗体确切区分。但不同亚类(IgG 1和IgG 2)的抗体通常不能被二抗确切区分。
2. 在试图进行双标记实验之前,应进行单标记实验,摸出不同的第一抗体和第二抗体的最佳稀释度。
3. 在进行双重染色之前,必须对所选择的一抗分别进行单独染色预实验,预实验条件必须与双染条件相同,在观察预实验结果和抗体定位正确后,再进行双染实验。
组织切片做免疫荧光时,背景色重时的两种情况:
一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色;
二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。
针对第一种问题有以下几点建议:1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净(非常重要) 5. 选用高品质封片介质。
针对第二种问题有以下几点建议:1. 曝光时间的控制 2. 暗室操作。
组织切片做免疫荧光,背景色太重怎么办?
组织切片做免疫荧光,背景色太重,在共聚焦显微镜下激发都是一片一片的光,在倒置显微镜下看倒还可以。怎么去除背景色?
4 评论
细胞双标免疫荧光
做细胞双标免疫荧光,单独用红色的二抗都能染出所要的指标,由于要检测两个指标是否有共定位,需要选择另一种颜色的荧光二抗,转染后的细胞自带绿色荧光,于是选了蓝色的二抗,以上指标再用此二抗均未见荧光,实在很苦恼,试过多种办法,均无法作出满意的结果,毕业在即,继续有大侠指点迷津,谢谢!
冰冻切片免疫双染的背景问题
比如说,一个是红色荧光,一个是绿色荧光,在绿色荧光层面上会出现比较强的背景,甚至假阳性,而红光层面上背景较少,请问怎样消除或减弱绿光的背景,双染时两种二抗的滴度较之单染需不需要修改
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免疫荧光双标记
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