条件:dNTP:0.5ul,Buffer:2ul,Mg2+:0.6ul,-F/R:0.6ul,genomic DNA:1ul,H2O:14.7ul 分别在50、56、60度跑过,DMSO+/—,都没有跑出明显条带。 PS:上游引物的第2个碱基有多态性,会影响么?
如果就是第二个碱基一个有多态性,那么一般不会有多大影响的,建议你换一个聚合酶试一试,我P过很基因,有些基因就是有一些酶怎么设置都P不出来,结果其他几种可能就能P出来,或者你可以拿最普通的2X预混的先摸一下退货温度之后,看看能否P出来,再进行高保真的PCR.
扩增10个正常人,如果有人出来,有人出不来,那就是你的碱基多态性导致的。
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