标签: T、B 淋巴细胞
淋巴细胞主要分T淋巴细胞和B淋巴细胞两大亚群,它们具有不同的特性和功能,用于(1)免疫学研究(2)淋巴细胞的鉴定。
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1. 分离B细胞过程较长,为了避免B细胞自然死亡,在最后冲洗B细胞时可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。
2. 每次洗涤时,不要将试管底部液体吸干,即防止压积的B细胞接触空气。
3. 使用抗B淋巴细胞血清与受检细胞按NIH方法进行微量B细胞毒试验,使用倒置相差显微镜读数。
关于从小鼠脾脏中分离:
1.脾脏组织所含结缔组织比较少,可以直接在筛网上研磨,无需剪碎,也不用顾虑血管。
2.ficoll中含多聚糖,所以许多人喜欢把它放4度存放,是否室温对实验影响不大脾脏分离淋巴细胞实验比较简单,所以用普通的淋巴细胞分离液就行。
3 .离心2000rpm×20min,这步很关键,还有就是加细胞悬液时一定要贴壁缓慢加入,不要破坏分界面,分离液与细胞悬液我常用1:2,还有就是所选用的离心管粗细也会影响分层。
4.中间的悬浮白色环状细胞层即是所要的淋巴细胞层。
5.洗细胞主要是洗去分离液,所以不能省去。
分离PBMC
有具体的分离PBMC的步骤吗?
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