1.我从文章中找到一些RT-PCR引物,发现有的能与DNA结合,而有的根本不能互补,请问这是为什么。 2.RT-PCR引物是从文章中找还是自己设计,文章中的可信吗,有人说用primer5.0,但该程序未见用于rt-pcr,用primer express设计是否更好?
最好自己设计引物,文章的可信度要看文章的来源和你的验证结果。但是还是推荐你自己设计引物。 我们通常是用primer5.0,和oligo 6设计引物。这两个软件大家用的最多。
自己设计比较好,毕竟是个学习的过程。在设计引物时要遵守一些原则,在RT-PCR的引物设计时,最好上下游引物是跨外显子设计,避免DNA的污染,在5‘端最好不要是G,因为G有干扰荧光染料的作用,要避免。当看到自己设计的引物,成功地跑出特异性的条带时,还是很振奋的!对RT的原理能够更进一步的认识。
可以去pubmed的基因库找你需要的引物序列
多个高影响因子的文献应用的引物,还是比较可信的
其实设计引物的过程是学习的过程,如果有兴趣就自己设计,能更多了解相关知识,如果为了完成实验,那么完全可以找公司设计,他们有比较专业的人员,多数情况下你只需要在该公司合成引物即可。
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