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染色体CBG标本制备实验

标签: 染色体 标本制备

异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈 现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部 分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。

详细
实验方法
  • 基本方案
实验方法原理
异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。

抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先,酸处理可使DNA脱嘌呤,但未使DNA骨架断裂;其次热碱处理可使DNA变性,促进继发的DNA溶解;最后,热盐溶液使DNA骨架断开并使碎片溶解进入溶液中。因此,最终以Giemsa染料显示出DNA的不同分布。在优良的C带标本中,常染色质只呈现中期染色体的一般外貌,结构异染色质区着色很深。C带在检查1、9、16特别是Y染色体的异质区时尤为重要。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、用品和试剂
0.2N HCl,5% Ba(OH)2,2×SSC,Giemsa染色液。恒温水浴箱,染色缸。其余同外周血染色体制备。
 
二、操作步骤

基本方案
 
1.   酸处理:常规制作的染色体标本(未染色)置0.2 N HCl(室温)处理15-30分钟。水洗。
 
2.   碱处理:浸入已预温至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分钟。水洗。
 
3.   热盐处理:置2×SSC溶液(67℃)处理60-90分钟。水洗。
 
4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10-5分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。

替代方案:
 
1.   酸处理:常规制作的染色体标本(未染色)置0.2 N HCl(室温)处理60分钟。水洗。
 
2.   碱处理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15-20秒。水洗。
 
3.   热盐处理:置2×SSC溶液(60℃)90分钟。水洗三次。
 
4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。
 
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