标签: DNA 重组 限制性内切酶 酶切 连接 连接酶
DNA的连接和酶切可用于:(1)利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一;(2)成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。
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1.取200ul离心管按下表加入试剂。2.混匀后点动离心,将溶液甩至管底。3.置于已调好温度为12℃-14℃水浴锅(或PCR仪)中。4.保温2h后取出。5.电泳检测。
λ/EcoT14 I 样品 10ul(兼作 DNA Marker)+ 10X的loading buffer
DNA连接样品:10 ul + 10X的loading buffer 2 ul6.DNA连接片段的电泳预期结果。
双酶切引物电泳出现两条带
目的片段1500bp连接TAKARA 的PMD-19-T载体之后,提完质粒,用双酶切引(SacI XhoI)物跑电泳,出现两条带,一条是2000以上的带,一条是目的片段,这是怎么回事
1 评论
双酶切后的DNA去磷酸化处理时应该在酶切同时进行还是酶切后再进行去磷酸化处理?
小妹新手,迫切需要学长学姐的提点~~~ 双酶切后的DNA去磷酸化处理时应该在酶切同时进行还是酶切后再进行去磷酸化处理?
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