抑制神经再生基因Nogo的发现为视神经损伤的修复、视功能保护研究带来了希望。视神经胶质细胞包括星形胶质细胞和少突胶质细胞2 种类型,分化不同,功能各异。成熟的少突胶质细胞不再具有分裂增殖能力,为分裂终期细胞[1],培养较为困难。
本实验采用视神经组织块培养的方法,对新生大鼠的视神经胶质细胞进行条件化原代培养,利用少突胶质细胞和星形胶质细胞生长条件的不同,采用条件培养基纯化2 种细胞。
少突胶质细胞和Ⅱ型星形胶质细胞是从一种普通双潜能的少突胶质细胞-2 型星形胶质细胞祖细胞发育而来[1]。
大鼠出生后约1 周,少突胶质细胞逐渐成熟。
因此,从新生大鼠取材可获得O2A祖细胞。
体外研究发现甲状腺素、胰岛素、转铁蛋白、腐胺、黄体酮和微量元素硒等,可使O2A 祖细胞朝少突胶质细胞定向分化。
而血清等可以诱导O2A祖细胞分化为Ⅱ型星形胶质细胞[1、4]。
我们利用这一特点,逐步减少条件培养基中的血清浓度,促进O2A祖细胞向少突胶质细胞分化。
最终采用无血清条件培养基,抑制星形胶质细胞及其它异质细胞增殖,而少突胶质细胞在此条件下则基本不受影响。
GC是表达于少突胶质细胞膜以及髓鞘的一种主要类脂,它是识别少突胶质细胞普遍应用的特异性化学标志物[1、3]。
免疫染色鉴定结果表明纯度较高超过 90%。此方法简便、可靠、易于推广,便于对少突胶质细胞相关课题进行研究。
二、文献
1. 何平,沈馨亚. 少突胶质细胞增殖和分化的研究进展[J],神经解剖学杂志 ,2000,16(2):183-188.
2. McCarthy K D, DeVellis J. Preparation of separate astroglial and oligodendroglia cell cultures from rat cerebral tissue [J], J Cell Biol 1980,85: 890-902.
3. 伍亚民,马海涵,廖维宏. 大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定[J],创伤外科学 2000,4:207-209.
4. Raff MC, Miller RH, Noble M. A glial progenitor cell that develops in vitro into an astrocyte or an oligodendrocyte depending on culture medium [J],Nature 1983,303(5916): 390-6.