标签: 大鼠 主动脉 内皮细胞 细胞培养
大鼠血管内皮细胞培养可用于:(1)血液流动性、防止血栓形成、调节血管张力等研究;(2)选择性通透性以及免疫调节等方面研究。
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1. 颈椎脱臼处死大鼠,将整个大鼠浸泡于75%乙醇中消毒约1 min。在无菌状态下,逐层剪开胸腔,分离取出主动脉,放含无菌 D-Hanks’液培养皿中。
2. 用眼科剪、镊尽量去除血管外膜的脂肪和纤维组织。然后,用含抗生素的D-Hanks’液冲洗血管的外表面及血管腔内的凝血数次,再放入另一无菌培养皿中。
3. 用眼科剪纵向剪开血管,平展在培养皿中。用非常锐利的手术刀将其切成1 mm3大小的动脉植 块(或者用剪刀剪,依照个人习惯),然后种植到培养瓶或培养皿(培养瓶或皿用1%明胶预置 37℃下过夜, 使用前2h 移入CO2培养箱中。用时可以先经含 10%小牛血清的培养液冲洗)。将动脉植块的内膜面与瓶底接触,种植密度约为 1 块/cm2 。
4. 置培养箱中静置2 h(干贴壁)。然后,加入0.5 ml 含 25%胎牛血清的培养液,液量以略盖过动脉植块内膜面,而又不使植块漂浮为宜。24 h 后,更换培养液,加入 2-3 ml 培养液。
5. 72 h 左右的时候,当观察到内皮细胞充分长出,而成纤维细胞刚要长出的时候,将动脉植块除去,刮除成纤维细胞,换培养液1 次。以后每2 天换液一次,每次换1/2~1/3 的液量。继续培养 8-10 d, 细胞融合成单层,即可传代。
1. 自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。
2. 在超净台中,组织细胞、培养液等不能暴露过久,以免溶液蒸发。
3. 凡在超净台外操作的步骤,各器皿需用盖子或橡皮塞盖住,以防止细菌落入。
4. 操作前要洗手,进入超净工作台后要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦拭手。试剂瓶口也要擦拭。
5. 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼。金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,且冷却后才能夹取组织。吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。
6. 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。
7. 不能用手触及消毒器皿的工作部分,工作台面上的用品摆放要布局合理。
8. 瓶子开口后要尽量保持45°斜位。
9. 吸溶液的吸管等不能混用。
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