关键词: 高通量 自动化蛋白组学分析系统 人视网膜蛋白质组 分析
来源: 互联网
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目的 用2-D电泳分析和高通量自动化质谱仪进行人视网膜蛋白的分析鉴定。
方法 人视网膜组织在广东省眼库获取。基于视网膜蛋白的不同溶解度,可以用顺序提取法将不同的视网膜蛋白分离。在2-D电泳中,视网膜蛋白质按等电点(PH3~10)和分子大小被分离,部分作银色进行观察分析。
另用Colloidal Coomassie蓝进行染色,用PROTEINEER SP系统将96个大分子蛋白斑点筛选切除,PROTEINEER DP水解仪进行完全自动的蛋白质水解。用于MALDI-TOF-MS分析的样品收集在AnchorChip,并进行作质谱分析,用自动化Mascot进行数据搜索。
结果 大部分视网膜蛋白可以在Tris缓冲液(EB1)及进一步的含尿素及CHAPS(分别含量为70%和28%)的缓冲液(EB2)中溶解。只有很少视网膜蛋白可溶解在SDS缓冲液(EB4)中。在2-D电泳中分离出的蛋白质特性与在EB1及EB2中分离出的蛋白质特性相似。
很少部分的蛋白质只能经EB2萃取后经2-D电泳分离到。在机器自动化蛋白质分析鉴定中,总的成功检出率为67.8%。特别是那些有较好MS谱图的蛋白分子有着更高的检出率(>90%)。已鉴定出的蛋白质分子按其生物学特性进行分类,见大部分被检出的蛋白质属于新陈代谢相关的蛋白(>30%)。
结论 我们提取不同溶解度的人视网膜蛋白作2-D电泳分析,高通量自动化系统适用于人视网膜组织蛋白的研究。
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