关键词: 凝胶电泳
来源: 互联网
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1.用不同方法诱导细胞调亡后,取106调亡细胞,置1.5ml离心管中,用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟,去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍,100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0,在旋涡混悬器上混悬20秒钟,破坏细胞,变性蛋白质。
2.加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液,混匀;加入300μl 100%乙醇,4℃保存过夜。
3.在微量离心机上全速离心30分钟,去上清液。加入75%乙醇同样离心洗涤沉淀物2次。用20μl含100μg/ml无DNA酶的RNA酶的TE缓冲液消化RNA,37℃ 30分钟。加入10μl甘油和少量溴酚蓝,直接点样。
4.用50ml TAE溶解2g琼脂糖,加入0.25μg/ml溴乙啶。倒板后加样,用100bp DNA标记物作为标记。25mV电泳过夜。在紫外线下观察结果。调亡细胞的DNA呈相差200bp的条带的梯形图。
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