关键词: 凝胶电泳 方法
来源: 互联网
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一、目的:
1.学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。
2.掌握垂直板型电泳的基本操作技术。 二、原理:
由实验十五中已知,蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。
1967年,Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS),则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。在一定条件下,蛋白质的分子量与电泳迁移率间的关系,可用下式表示:
因此,测定某个蛋白质的分子量,只需比较它和一系列已知分子量的蛋白质在SDS-凝胶电泳时的迁移率就可以了。后来,Weber等人基本按Shapiro的方法对约40种蛋白质进行了研究,进一步证实了这个方法地可行性(见图16-1)。用这种方法测定蛋白质的分子量,简便、快速,只需要廉价的设备和微克量的蛋白质样品;所得结果,在分子量为15,000~200,000的范围内,与用其他方法测得的分子量相比,误差一般在±10%以内。因此,近几年来,SDS-凝胶电泳测定分子量的方法,已得到非常广泛的应用和迅速的发展。
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