关键词: 毛细管电泳 质谱联用 技术
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毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)是80年代初发展起来的一种基于待分离物组份间淌度和分配行为差异而实现分离的电泳新技术。具有快速、高效、分辨率高、重复性好、易于自动化等优点。质谱分析技术(MS)是通过对样品离子的质量和强度的测定进行定量和结构分析的一种分析方法。具有分析灵敏度高、速度快等优点。这两种技术的联用(CE/MS)综合二者优点成为分析生物大分子物质的有力工具。本文对近年来CE/MS中的接口及样品预浓缩技术作一综述。
1 仪器结构
任何一种类型质谱仪诸如傅立叶变换离子回旋加速共振质谱(FT-ICR) 、飞行时间质谱、离子陷阱质谱和三级四极杆质谱等均可与CE联用,但四极杆质谱与CE联用最常见。在各种CE与质谱联用中,区带毛细管电泳(CZE)最常用。
其它如毛细管等电聚焦电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳等应用较少。电子喷雾离子化(Electro-sprayIonization,ESl)是质谱首选的离子源。其理由有二:ESI可用于检测多种高质量的带电分子;其次,从CE分离出来的分子经过接口可以直接进入质谱仪。
2 接口技术
CE末端接口是影响整个检测的一个关键因素,所有CE/ESI-MS接口的目标都是为了获得稳定的雾流(Spray-Current)和高效的离子化。
由于CE需要较高离子强度、挥发性低的缓冲液,而ESI需要相对较低的盐浓度才能获得好的雾化及离子化。因此接口技术必须优化,使其尽可能提供好的电子接触,同时尽量减少对CE分离效率的影响。此外,对于每一种接口应选择相应的缓冲液。CE/ESI-MS接口共有三种类型:同轴液体鞘流(Coaxial Liquid Sheath Flow)、无鞘接口、液体连接。
2.1 同轴液体鞘流
此种类型接口是最常见的连接CE与ESI-MS的方法。该接口是一个同心的不锈钢毛细管套在电泳毛细管末端,鞘内充有鞘液。再在此不锈钢套外再套一个同心的钢套,鞘内通鞘气。鞘液与毛细管电泳缓冲液液体在尖端混合,同时被鞘气雾化。鞘液流量通常为每分钟纳升至数微升之间,但却显著高于CE流速。
由于鞘液的稀释作用,雾流稳定性得到改善。理想的鞘液缓冲液盐浓度应在高分离(高盐浓度)和高雾化(低盐浓度)间优化。由于鞘液在雾化过程中也完全蒸发,鞘液的稀释并不显著降低检测灵敏度。但混合液体的体积应尽可能小,以避免谱带展宽。
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