关键词: 流式细胞术 植物 DNA倍性测定
来源: 贝克曼库尔特
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实验简介
植物的基因组大小及 DNA 倍性和植物的品系、性状及营养和药用价值有密切联系。检测植物的基因组大小和 DNA 倍性在植物的鉴定、杂交育种等领域有重要意义。流式细胞仪可在半小时内完成从样本制备染色、植物基因组大小和 DNA 倍性测定全过程,以其方便快捷得到广泛应用。CytoFLEX 流式细胞仪具有优异的荧光分辨能力,可轻易区分不同大小的基因组,多达 10 的 7 次方线性检测范围,可更好地检测自然界或育种过程中广泛存在的多倍体现象。
材料与方法
▶ 试剂
▶ 样品制备
1. 配置溶液
● 溶液 I :0.1 mol/L 柠檬酸 4.2 g, 0.5% 吐温 20,定容至 200 mL, 4℃ 下保存备用
● 溶液 I I :0.4 mol/L 磷酸氢二钠 28.65 g,PI 20 mg, 定容至 200 mL, 室温下保存备用
2. 取 20 mg 洗净去除中脉的新叶置于塑料培养皿中 , 移取 , 用双面刀片将叶片切碎;
3. 用 1 mL 移液枪吸取切好的样品经 350 目尼龙筛网过滤到 1.5 mL Eppendorf 管中;
4. 对所得滤液在 13000 r/min 的条件下离心 30 s;
5. 用 1 mL 移液枪移去上清至 0.1 mL 处 , 加入新鲜的Ⅰ溶液 200 μL 悬浮沉淀;在准备用流式细胞仪检测样品时 , 再向样品中加入 600 μL 溶液 I I
数据分析
通过 PI-A/PI-H 双参数散点图排除黏连细胞,根据 2 倍体的位置判断其他倍体的位置。
实验结果
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HUVEC做transwell迁移实验膜上没有细胞
最近在做transwell预实验,用的Millipore transwell小室,8um孔径,说明书说不用铺胶,每孔10万个细胞,试了不同的培养时间,用结晶紫或DAPI染色后,发现膜上都没有细胞,只有类似下图中的圆圈,看着也不是细胞,加了因子的实验组圆圈数量要比对照组多。初次做这个实验,不知道是什么原因,恳请高手帮我分析一下。
4 评论
水稻根系活力的测定
不同水稻品种根系活力的测定,如何进行呢?
根系为什么是取0.25g,有什么依据吗
因为看有些资料做的是取0.5g
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