关键词: 酵母 表达 纯化
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问:酵母经过甲醇时间段诱导后,再进行离心,取得的上清就是蛋白吗?还需要过NI柱子吗?需要破碎吗?谢谢大家指导,本人对酵母的表达和纯化一点也不晓得,只做过真核和原的表达与纯化,现在就是不晓得酵母的纯化与一般真核(可溶性表达产物)的纯化是不是一样的,谢谢大家,我酵母阳性重组子已筛选出来,下一步就得做诱导了,但对酵母表达纯化一点也不晓得,烦啊
答1:若是分泌型蛋白,蛋白应在上清中,采用什么柱与你的蛋白标签有关,不需要要破碎.
答2:我不清楚你所说的阳性克隆子已经筛选出来,是指什么?是PCR鉴定出了你的目的基因呢,还只是在RDB或MD或G418平板上筛选出来的克隆呢?如果是做到这一步,你可以参照Invitrogen的毕赤酵母表达手册上的方法进行诱导表达。直接从平板上多挑克隆,用MGY或BMGY培养基培养,再用BMMY培养基诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白是否表达,同时选择高表达株,同时用western-blotting鉴定是否你的目的蛋白就行了。
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分不出病毒的原因
我用SPF鸡胚培养病毒,结果老是分不出来,这是什么原因?楼主能不能帮我分析一下,感激不尽。
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豆辩实验大肠菌群
我想去学但我不憧怎么快速学
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高密度发酵与目的产物之间的关系如何
如题,我认为,对于表达蛋白分子量大的,可能OD上去就相对难点,请问各位这种理解是否正确?如何设计实验?
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