关键词: 酵母 表达 方法 心得
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经过不断的努力,终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来,希望对正在努力中的XDJM有所帮助,也以此感谢丁香园对我的帮助。
分泌型载体:pPICZaC 宿主菌:X33 培养基:BMGY/BMMY 目的蛋白:20KD
1、表达过程中防止污染是第一关键,酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培养时,可进行挑单菌落培养24h,而不用常规的1%接种。摇床可定期用75%酒精喷洒消毒。
2、如果只是检测用,用试管小量培养。先前用250ml的锥形瓶培养,既浪费材料,又耗费精力。目前表达出来的蛋白就是在试管(十几,二十ml的那种)培养的。
3、 1.5ml的BMGY激活24h后,换液,BMMY也用1.5ml.用多少的BMMY决定了你的蛋白表达出来的浓度。用等体积换液,表达完收获的上清不用浓缩,直接上SDS-PAGE。如果担心浓度不够,可缩小BMMY的体积,那实际上也等于在浓缩上清。
先前采用大量培养再取上清进行TCA-丙酮法,丙酮法,氯仿-乙醇法浓缩,效果都不好。
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分不出病毒的原因
我用SPF鸡胚培养病毒,结果老是分不出来,这是什么原因?楼主能不能帮我分析一下,感激不尽。
2 评论
豆辩实验大肠菌群
我想去学但我不憧怎么快速学
1 评论
高密度发酵与目的产物之间的关系如何
如题,我认为,对于表达蛋白分子量大的,可能OD上去就相对难点,请问各位这种理解是否正确?如何设计实验?
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