免疫组化非特异性染色太深怎么办?
本人从事免疫组化实验做了好多年了,刚开始做这方面实验,出现了不少问题,最让人头疼的就是非特异性背景染色问题。经过多年的摸索和亲身实验,摸索出问题的症结所在,针对免疫组化中存在最常见的非特异性背景染色问题,给予一些本人的见解和经验总结,希望对做科研的工作者们一些帮助和指导,也希望各位专业人士能给予批评指正。当然这些经验总结和问题的,离不开丁香园、小木虫、中华病理网以及舜百公司专业病理人员的指导和帮 ...
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细胞爬片的免疫组化染色
1. 取出细胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。2. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。3. 打孔液浸泡 5 分钟。4. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。注:第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原,检测细胞膜抗原时不用。5. 正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗 体 同源动物血清)处理,37℃ ...
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免疫组化troubleshooting
免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(Immunocytochemistry)。
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常用抗体标记荧光染料的选择
随着免疫荧光技术的不断发展,荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前,市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势:1. 新型罗丹明核心罗丹明染料以优异 ...
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