丁香园论坛资料整理:流式细胞周期检测QA(二)
上流式前细胞用75%乙醇固定行吗?Q:我养肿瘤细胞,测周期。看到帖子说70%乙醇必须用PBS和乙醇配,用水配细胞会碎裂,有帖子说PBS和乙醇配会出现絮状物。上流式前细胞用75%乙醇固定,就用买来的现成的瓶装75%乙醇,行吗?必须那么严格吗?A:先用冷PBS悬浮细胞,大约1-2ml,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是:直接加入 ...
来源:互联网 30910 阅读
ELISPOT入门知识
一、 ELISPOT技术概述 1. 技术原理和技术特点 ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(即ELISA技术),能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理,一句话概括就是:用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子,并以酶联斑点显色的方式将其表现出来(Sedgwick JD 2005)。 ...
来源:互联网 30859 阅读
NK细胞活性测定:LDH法
乳酸脱氢酶(LDH)测定法1 原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞 类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。2 ...
来源:互联网 28886 阅读
流式胞内染色protocol
一、surface marker染色1、收获细胞,0.5-1x10e6/tube,用FACS Buffer 2ml洗涤一次,倾倒后滤纸吸干管口液体2、加入预先配置好的你需要染的surface marker的抗体混合液(即CD3CD4CD8抗体mixture)充分混匀,室温下孵育20分钟3、FACS Buffer 2 ml洗涤一次倾倒后滤纸吸干管口液体二、Intracellular Stainin ...
来源:互联网 26679 阅读