关键词: CTL实验 杀伤实验
来源: 丁香园
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先说一下啥是CTL,CTL就是细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL),一般应用于肿瘤研究领域。
CTL 杀伤靶细胞主要有两种途径:即细胞裂解性杀伤和诱导细胞凋亡 ( Apoptosis)。
前者指 CTL 分泌诸如穿孔素一类的介质损伤靶细胞膜;
后者指 CTL 通过表面 FasL 与靶细胞表面的 Fas 结合,或者通过释放粒酶 B 至靶细胞后诱导靶细胞凋亡 (Apoptosis)。
一般 CTL 杀伤实验步骤有如下几步:
1、制备效应细胞,靶细胞,用 RPMI-1640 培养液调至所需浓度。2、于 96 孔培养板上进行杀伤试验,设有杀伤试验孔(效、靶细胞各 100ul),自发释放孔(靶细胞 100ul,RPMI-1640 培养液 100ul),最大释放孔(靶细胞 100ul、1%PN-40 100ul)每孔均设 3 个复孔。3、于 37 度。5%CO2 孵育箱培养 2 h。4、用冷 0.9%NaC l50ul/孔中止效靶反应。5、1500rpm,离心 5 min。6、每孔取上清 100ul,置于酶标测试板中。7、每孔加入 100ul LDH 室温反应 10~30 min。8、每孔加入 30ul 0.1mol/L 柠檬酸钠,中止酶促反应。
9、于酶标仪上 570nm 处测 OD 值。
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