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抗体和重组蛋白使用保存方法

关键词: 抗体 重组蛋白 保存 2018-03-07 09:53 来源:剑药 点击次数:163

无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,Cambridge Bio 的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。

1. 收到抗体和重组蛋白后的操作

收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态),请务必在 4℃,12000rpm,离心 3 分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(如果抗体和重组蛋白体积小于 50µl,请延长离心时间至 5 分钟,以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来,干粉状态的同样适用)。Cambridge Bio 的抗体和重组蛋白使用特制的储存管,只有在 12000rpm 离心 3 分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来(即使是在 10000rpm 离心也会离心不完全,导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象)。请详细阅读说明书,并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。

2. 抗体和重组蛋白的长期保存

对于 Cambridge Bio 大部分抗体和重组蛋白,比较合适的保存方式是:抗体分装后保存在 - 20℃,重组蛋白分装后保存在 - 80℃。

(1)分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。

(2)分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于 10µl 每份。因为分装体积越小,抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。

(3)复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完,将剩余母液保存在 4℃,避免再冻起来。

(4)抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完,4℃保存尽量不要超过 1 天。

(5)绝对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,避免温度变化造成反复冻融。

3. 抗体和重组蛋白的短期保存

大部分 Cambridge Bio 的抗体和重组蛋白收到后 4℃短暂保存 1~2 周,对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用(1~2 周内),推荐在 4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。

4. 抗体和重组蛋白的运输条件

一般的运输过程需要 1~2 周的时间,所以是在低温 4℃的条件下来完成的。4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的,为了分装就需要解冻,这就多了一次冻融的过程),所以运输过程中一般避免干冰运输。

5. 抗体和重组蛋白的稳定性

(1)抗体的稳定性是自然界长期进化的结果,抗体是免疫系统中最重要的分子之一,其稳定性是自然进化筛选的结果,在众多物种中,抗体分子形成了保守而稳定的结构。

(2)抗体的高 Tm 值,在室温下,甚至短时间温度达到 50~60℃,抗体分子都能维持正确折叠,保持其应有的活性。

(3)抗体和重组蛋白的纯度。Cambridge Bio 采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术,确保抗体和重组蛋白产品的高纯度,保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。

(4)抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失,高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。Cambridge Bio 大部分抗体和重组蛋白浓度为 1mg/ml,抗体和重组蛋白纯度高,特异性好,效价更高。

6. 重组蛋白的特性

Cambridge Bio 的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式,原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态,真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存,这样使得重组蛋白非常稳定,在 - 80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,其中溶解的方法非常关键,因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意,这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。

(1)原核细胞表达的重组蛋白。Cambridge Bio 大肠杆菌表达的冻干重组蛋白,已经从包涵体中提纯,添加了蛋白保护剂,使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可,复溶冻干蛋白 100µg,用 86µl 的超纯水,轻轻摇晃使蛋白溶解,再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解,一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。

(2)真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译,还要进行翻译后的加工,使得蛋白质的空间折叠方式维持正常,所以重组蛋白必须在真核细胞中进行,如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子,对翻译后的蛋白质进行加工,这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存,保持了其良好的活性和稳定性。

(3)重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加 8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集,甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。


编辑: 齐梦霞2
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