杂交瘤技术基本程序与方法
一、杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果,抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等,为杂交瘤技术提供了必要理论基础,同时,骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日,Kohler和Milstein在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗 ...
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佐剂的制备和作用
一、概念 佐剂(adjuvant)是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质,应用时可与抗原同时或预先注射于机体。佐剂本身可以有免疫原性,也可以没有免疫原性。 应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性,从而提高抗体的效价。颗粒性抗原(如细菌、细胞)因具有较强的免疫原性,一般情况下不使用佐剂即可取得较好的免疫效果。对于可溶性大分子量的蛋白质免疫原、人工抗原,初次免疫时必须使用佐剂才能取得较 ...
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阳性克隆的筛选(panning)
阳性克隆的筛选(panning) 一个筛选实验包括数轮识别和复制过程。在每一轮中特异性结合的克隆被选择和扩增。这些克隆在大约3~5轮之后便可居于多数。每轮的富集系数约为102~103因此3轮之后一个特异结合克隆将富集106~109倍。 【材料和试剂】 (1)ELISA板 (2)湿盒 (3)0.1mol/L Na2CO3(pH8.6) (4)3%BSA (5)TBS ...
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单克隆抗体制备详述
1、动物免疫(1) 抗原制备制备单克隆抗体的免疫抗原,从纯度上说虽不要求很高,但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加,同时可以减轻筛选的工作量。因此,免疫抗原是越纯越好,应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说,抗原的来源有限,或性质不稳定,提纯时易变性,或其免疫原性很强,或所需单抗是用于抗原不同组分的纯化或分析等,免疫用的抗原只需初步提纯甚至不提纯,但抗原中混杂物很多,特别是如果这 ...
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