关键词: 细胞因子 免疫调节 流式细胞术
来源: 贝克曼库尔特
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实验简介
细胞因子在淋巴细胞免疫功能调节方面发挥重要作用,它可以调节多种细胞的生长、分化和功能,调节正常与病理状态下的免疫应答。研究生理或病理免疫调节因素导致细胞因子合成的应答与改变是探寻疾病病因与免疫状态关系的重要工具。
本实验采用优化的一管 8 色的多色检测方案对人外周血 T 细胞亚群的 IFN-γ、IL-17、 颗粒酶、穿孔素表达情况进行了研究。从实验结果图上可看出,本实验在 CytoFLEX 上检测时各细胞群体分群明显,检测结果确切可信,能够非常漂亮地完成此类实验。
材料与方法
▶ 试剂
▶ 样品制备
1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640,并加入适量 PMA 等试剂,刺激 4 h;
2. 混匀后去 100 ul 刺激后的标本并加入相应膜抗,室温避光孵育 20 min;
3. 加固定液,孵育后离心去上清;
4. 加入适量生理盐水,1500 rpm 转速下离心 5 min 去除上清液;
5. 加破膜液混匀,并加入相应胞浆抗体适量,混匀后室温避光,孵育 20 min;
6. 加入适量生理盐水,1500 rpm 转速下离心 5 min 去除上清液;
7. 重复 6;
8. 加入 300-500 ul 预冷的 PBS,混匀后上机检测。
数据分析
使用 CD45/SSC 设门,选取淋巴细胞群(设逻辑门排除掉混杂的单核细胞),然后再取 CD3+T 淋巴细胞;分 别分析 Th 细胞与 TS 细胞的相关因子的表达情况。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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