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wo4haoren:,小弟正在用G418筛选单克隆,用的是平皿,一个平皿长了大概几百个吧,但是怎么把单克隆消化,转板呢? 没有想到好的方法,想定点消化,发现胰酶会很快扩散,消化到其他克隆,很郁闷,有做过的大侠交流下经验,不胜感激!
丁香园网友cmingwen认为:
可以用枪头或者是无菌的东西把单克隆刮下来,再放在孔板培养,应该可以!
丁香园网友xinyinhancidian认为:
一般是用克隆环,根据克隆的尺寸买克隆环。
克隆环类似于空心塑料环,将底部稍微蘸一些无菌的凡士林,在皿中的液体被吸干后(准备消化),一个一个扣住每一个你想挑的克隆,加少量胰蛋白酶到克隆环中,消化,加带血清培养基中和,用枪头将每个环内的细胞吸出来,小离心管离心收集细胞,种到48孔甚至96孔板里(看细胞多少)。
当克隆数目较多时,注意不要让细胞风干了,动作快点,而且每个孔中预先加一点点PBS,不会影响酶消化。
Corning 有卖,会比较贵,国内不知道哪里有价格合适的。
好像前面有帖子说自己用枪头制作克隆环的,具体如何操作,你去看看。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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