提取细胞RNA的方法
问:请问提取细胞RNA的方法?答:细胞总RNA的提取:1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置2-3 min后,12000 rpm,15 min,4 ℃,离心。然后 ...
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分离细胞浆和细胞核蛋白全攻略
DXY网友qingraner提问:本人核浆分离做了最少两个月了吧,似乎没有什么进展,我想请问高人指点一下。我很想知道我的配方有什么问题,或者是我的操作有什么需要注意的地方。十分感谢!还有,我检测的方法是用Ikb-α(标细胞质)和Oct-1(标细胞核),似乎抗体也不是很好用。我做的是BT474细胞,breast cancer cell。我的方法如下:1、用Buffer A 洗涤2、 ...
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细胞裂解
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞,但也会造成DNA 的断裂。一、机械裂解法主要有以下两中:1、热休克(Thermal shock),既 ...
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RIPA裂解液配方
1ml RIPA buffer contains 35μL proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0. ...
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