关键词: 杂交瘤 细胞株 稳定性
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在液氮中保存的细胞株及体外传代培养的细胞株,都需要定期检查染色体数和抗体产生能力,因有些杂交瘤细胞会逐渐丢失染色体,使产生抗体的能力丧失或减弱。此时需及时进行克隆化,保留稳定分泌抗体的细胞株。
一、杂交瘤细胞染色体检查
材料和试剂
1. 秋水仙素。
2. 甲醇,冰醋酸。
3. Giemsa染液,玻片。
操作步骤
1. 取传代培养24h的细胞,加0.1ml秋水仙素,放37℃水浴4h。
2. 收集细胞2000r/min×10min离心弃上清,沉淀中加入0.075mol/L KCL 10ml,用滴管吹吸均匀,放37℃水浴15~20min,使细胞肿胀。
3. 离心弃上清后,沉淀细胞用甲醇3份、冰醋酸1份的混合液10ml固定20min。
4. 2000r/min离心10min,弃上清后取沉淀细胞涂片,自然干燥。
5. 用Giemsa染色,油镜检查。小鼠脾脏B细胞染色体约40条,SP2/0细胞染色体68条,杂交瘤细胞染色体100条左右。
二、McAb产生能力检查
取冻存复苏传代培养的杂交瘤细胞培养上清或诱生小鼠腹水,检测其抗体效价,特异性及亲和力,一旦发现杂交瘤细胞产生抗体能力减弱,应及时进行克隆化,保留稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。
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还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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