关键词: 细胞鉴定 形态学鉴定
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一、形态学鉴定
1. 在倒置显微镜中直接观察活细胞的形态学特征
2. 细胞染色检查 :
a) 将无菌玻片置于细胞培养皿中,加细胞悬液后培养;
b) 待细胞长满玻片后取出,用PBS清洗,之后放于载玻片上,待其自然干燥;
c) 用PBS/甲醇(1:1)固定15分钟;
d) 弃固定液,加合适的染色液染色;
e) 染色完毕后用清水洗净,置于空气中干燥,
f) 干燥后,用二甲苯透明,光学树脂封片后观察。
二、免疫组织细胞化学鉴定
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片;
2. PBS清洗标本3次,各1 分钟;
3. 4%多聚甲醛固定15分钟;
4. 置于空气中干燥;
5. PBS清洗标本3次,各2 分钟;
6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分钟;
7. PBS清洗标本 3次 各2分钟;
8. 3%H2 O2 孵育 15分钟;
9. DPBS清洗标本 3次 各2 分钟;
10. 封闭血清孵育(5%正常二抗血清DPBS液20分钟;
11. 一抗孵育,4℃ 过夜或37℃ 60 分钟;
12. PBS清洗标本3次 各5 分钟;
13. 二抗工作液孵育(湿盒)37℃ 30 分钟;
14. PBS清洗标本3次 各5 分钟;
15. C液(湿盒) 37℃ 30 分钟;
16. PBS清洗标本3次,各5 分钟;
17. 用显色液进行显色;
18. 蒸馏水洗涤2次1 分钟;
19. 苏木素复染1分钟;
20. 清水洗涤30分钟;
21. 光学树脂封片后观察。
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还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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