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失败—成功—体味—收获—思考—交流,讲述你我细胞实验中的故事

关键词: 实验 细胞 故事 2014-03-25 17:24 来源:互联网 点击次数:2370

1、作者:windboy77

实验感受:记得刚养心肌细胞时候,开始时候很顺利,但有一次突然细胞就不怎么贴壁了,换液时候一吹打,就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱,可是别人的细胞都长的很好啊,培养基的问题?

我仔细观察了一下,培养基粉红透亮,绝对不会污染,血清也没有问题啊,大家都是公用的血清,当时我很迷惑,后来我象老师如实反映问题,他听完我的叙述后想了想,让我把培养基拿给他看,然后告诉我,你的培养基颜色太深了,肯定偏碱,细胞在偏碱的情况下培养,耐受能力会逐渐下降,可能是产生脱壁现象的原因,后来我重新测了一下培养基,为7.5左右,我用灭菌的HCL调了一下,培养基颜色变成淡红透亮。

再次培养,发现细胞贴壁比较好了,搏动效果也不错,因此,我以后每次培养前都要重新调好PH值,我觉得很多因素是能影响PH值的,这也算是实验的一点收获吧,呵呵,当然还有别的体会,以后慢慢说吧。

2、作者:冬日阳光

实验感受:在做实验时经常会有一些低级错误的发生,例如,我在做细胞免疫组化时就发生了这样的一个错误:我的细胞是养在24孔板里的,细胞固定时我就直接加入了丙酮固定,结果扳子里面一片白白的,这时才赶紧询问他人,方知塑料制品会被丙酮所溶,真是好笨啊。

另有一次,我 做 细胞爬片 时,因为觉得盖玻片不好处理,就自做主张地用了载波片(那可是我 自己花钱去做的 小波片呀),结果是虽然细胞长在了上面,但是用荧光显微镜观察细胞染色情况时却怎么也看不清楚(以后换用了盖波片就好了)。

被实验室主任训了一顿:谁让你自做主张换波片的?唉,不仅花了钱,浪费了 时间,白费了心血,才得出这样的结论。望xdjm做实验时一定要多咨询多请教噢。因为我所犯的 错误既往都有发生过。

3、作者:hjws

实验感受:刚开始做彗星实验的时候,按照实验步骤一步一步的做,电泳完发现胶全脱了!哭啊!怎么想也觉得没做错啊,问了一个师兄,方才知道,载波片要先泡酸,洗净后再泡乙醇,用前再拿出来。试了试果然不错!高兴极了,拿着染好的片子去看,发现背景so红,简直什么也看不清,又郁闷了!

于是又东找西找,在园子里发现,有人染好后,将染液冲掉的,又试了试,果然!其实做实验的时候,有很多细节没写在实验方法上,还是要先请教一下做过的人,仔细看一下有关的文献之类,才不会多走许多弯路啊!

4、作者:savid888

实验感受:鄙人也算养了快一年的昆虫细胞了,而且最近又在做昆虫血液的原代培养,积累了点点经验(也许在高手看来根本算不了经验,贻笑大方啦),说出来大家共勉:首先,要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍,打造自己扎实的专业基础,为以后的操作作准备,这方面的书有很多,《体外培养的原理与技术》,薛庆善主编,科学出版社;《细胞实验指南》,D.L.斯佩克特,etc著,黄培堂等译;《细胞培养》,司徒镇强,等等……其次,每种细胞的培养条件都不相同,别人的经验和书本上的protocl都只能作为参考,真正重要的是自己培养过程中的不断摸索,这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录,随时总结。

再次,培养者极大的耐心,而过程中的影响因素又很多,这又需要培养者必须综合细胞培养是“细活”,其过程需要考虑各种影响因素,当出现问题时一一加以排除,找到最佳解决方案。我在这里没有讨论细胞培养的细节问题,因为那样的话是说不完的(也许有朋友会认为我在泛泛而谈,呵呵),暂且说到这,我去处理细胞了,以后再说……

5、作者:tangdl2000

实验感受:说起细胞培养,要说的确实很多。我就怎样防止污染说说我的体会。每个人都担心细胞被污染,每个人都碰到自己的细胞被污染。起初我学习细胞培养的时候,都是向师哥,师姐学习。基本上就是依葫芦画瓢。随着时间的推移,自己也就觉得有些步骤可以省略,有些就要注意。我个人认为比较重要的几点如下:

(1)东西一定要用自己的。既不要借别人的,也不要借给别人。可能大家觉得比较自私。实际上还是很有好处的。并不是每个人的操作都规范,因此相互之间串着用,很容易造成交叉污染。

(2)我习惯口对口倒液体,在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。步骤越简单,越能防止污染。而且还能节省很多吸管。

(3)一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路,又出工作间拿东西,这样增加了污染的机会。

(4)整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了,最好不要接。我一般操作的时候将手机关了,手机声音响起,好烦躁。

(5)我一般开紫外线照射台的时候,就将培养基、酶、DHANKS液那到室外让它自然升温。这样40分钟后,温度也升上来了。有很多人将他放到37度水浴锅里加热。一定要注意水浴锅的卫生,有的常年不清洗,里面很脏,容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用它的也一定要勤换水。从水域锅那出后,最好找个毛巾插干上面的水。

(6)操作前要洗手,用75%酒精搽手。

(7)用完操作台,要打扫卫生。

(8)细胞要经常冻存,我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。细胞状态差了,扔掉,重新复苏。这是一个必须养成的习惯。毕竟很多情况下,细胞并不是因为污染了,才让你感到头痛。这样你不会担心没有种子了。

(9)我一般是不加双抗的,只要注意,不会污染。

6、作者:炉灰渣

实验感受:怎么说呢?细胞培养的过程--痛并快乐着!

老师告诉我细胞培养与我的课题密切相关,我能不听吗?不能!

懵懵懂懂 地开始了学习,准备,预试验,实验。。。

当经历了失败,挫折,懊恼,郁闷;

硬着头皮询问,查阅,反思,尝试;

逐渐开始了解,见效,成功,喜悦,

这时,老师告诉我暂时放放!!

??我不知道说什么好,还能说什么!

这是我的痛!

但在细胞培养中还是有所收获,实验中我知道日常生活所谓的“清洁”与实验要求的“无菌”相去甚远!有好几次,实验中情急都不由的想去吹吹!哈哈,还好,戴着口罩!其次,发现细胞培养真是个淘冶情操的活动,无论你性子多急,脾气多燥,不想事倍功半的话,最好老老实实,小心翼翼,按部就班地操作!

半点马虎不得!最后,谈点实验心得,开始时总是刻意摩仿,简单操作,什么都不求甚解,结果是不断遇到问题,不断向别人请教,而别人只能提供通用的解决办法,对自己的问题没有什么帮助,最后还是要自己摸索才能解决!

费时费力费工!慢慢发现细胞培养很重要的是,自己只要了解试剂中每种成分的作用,实验中每一步的意图,遇到的问题就会迎刃而解!其实是就没什么问题了!◎

这是我的快乐!

7、作者:pinkhair

实验感受:开始养细胞的时候,实验室里只有一个师兄是养过的,很多东西不懂,刚开始师兄只肯让我洗管子,在旁边看;后来自己一步步学起来,看了很多资料,自己买耗材,去上海细胞库买细胞,配培养基、消化、冻存、复苏。

刚开始犯了很多错误,消化的时候严格按照参考书上写的来,结果5分钟后细胞全死了;冻存的时候在-20度放置时间过久,结果复苏的时候一管细胞活下来的就十七八个,把含细胞冻存液的培养基吸走加入新鲜培养基的时候观察培养瓶。

发现培养瓶简直比我洗的还要干净;后来知道光看参考书是没有用的,相同的细胞在不同的条件下实验条件也不同,需要自己摸索,参考书只能参考,不能照搬,现在差不多一个人同时养5个细胞没问题。还有我比较勤快,细胞室大部分时间都是我打扫消毒的,虽然累点,但是细胞不污染,比什么都强。

8、作者:savid888

实验感受:好几天没来园子里逛了,瞎忙啊,接着上面的话说:有一点我要提请所有养细胞的战友们注意的是,从做原代细胞培养的一开始,就必须有一个理念,那就是想着我的建系(株)会成功(这也是师兄师姐们毕业前传授的“秘笈”),其意思不是说成天想着我所建的系以后如何如何有价值(As we known,并不是每一种新建的细胞系都有很大的价值,当然这个可能还是有的)。

实际上是说你在从一开始做实验的时候就要想到以后建系成功后的后续实验,包括细胞系的分子标记鉴定,病毒敏感性试验,建系后的细胞与原来来源组织的差异,etc.所以说要详细记录原来取材时的材料种类,生长状况等,以便以后的实验有一个相同的标准,否则就是实验设计欠缺合理性了(严重啊,老板会骂的!)。

另外,整个培养过程中要详细、客观的记录细胞的变化情况(包括文字和照片),对自己和下一届同学都是非常重要的第一手资料!一家之言,高手多多指教!

9、作者:xiaoyuaizuguo

实验感受:我曾经在自己制作的无细胞真皮上养过成纤维细胞,无细胞真皮是按照文献的方法制作的,把成纤维细胞接种到无细胞真皮上的方法也是按书和文献中的方法,可是很奇怪,成纤维细胞怎么都不长,我重复了好多次,结果都是失败,后来又做了对照,同样的条件,一个平皿中直接接种成纤维细胞,另一个平皿中放入无细胞真皮,再接种成纤维细胞。

结果,没有无细胞真皮的平皿中细胞长得很好,这样说明不是细胞和平皿的问题,那么问题在哪里呢?我苦思了很久,觉得是不是无细胞真皮在处理的过程中用到了一些化学药品,对细胞的生长有害,可是在接种细胞以前我已经按文献上的方法将无细胞真皮用DMEM培养液浸泡了48小时呀。

在后来的实验中我就将浸泡的时间延长,并在中间每天换浸泡液一次,经过5天的浸泡以后,成纤维细胞的接种最终成功了。这份迟到的成功提醒我,对于书和文献上的东西,不能不信,也不能全信,很多东西还得靠自己在实验中摸索。

10、作者:pure2000

实验感受:我从事细胞培养还不到一年,但已经从中体现了压力和乐趣:

(1)做事要认真,严格要求自己。不能因为偷懒或报有侥幸心理而不守规则。

eg.刷玻璃器皿的过程:初洗、泡酸(一天)、自来水冲洗(10遍)、纯化水冲洗(3遍)、注射用水冲洗(3遍)。感觉过于苛刻,自来水只冲洗3遍。被老师发现后,一阵痛批,才知道这是极其关键的一步,残留的酸可能会抑制细胞生长,甚至导致细胞死亡,痛失辛苦得来的细胞,心血付之东流。无知不能无畏,一定不能大意。

(2)找一个良好的老师。在专家的指导下可以事半功倍,很快的掌握操作技巧、发现不易觉察的问题、形成严谨的态风格、获得为将来技术水平的提高奠定基础的扎实的理论知识。找几本相关的书看一看。

(3)有一颗平常心。细胞培养不是算1+1=2那样简单,微小的操作差异或试剂批次间的差异会导致细胞状态和目的蛋白表达量的明显差别,不符合预期目标。不喜不悲,尽力而为之。

(4)做好准备工作。不要急于投身到细胞培养中去,要先设定计划:步骤,工具,试剂。特别是将细胞用于大规模生产时,尤其如此。eg.经过干热灭菌的容器一般认为可以在一周内保持无菌状态,如果准备多了,用不完的就得重新灭菌,耗费能源、占用灭菌空间,不值得;干热灭菌需要一天的时间,当器皿准备不足时,只能干着急,错过了最佳操作时间,也许得很久才能将细胞状态再调整好。

(5)养成良好的操作习惯。

1)物品准备充分,摆方整齐,有目的。在无菌操作过程中不要将物品拿进拿出,会增大染菌可能;无菌空间相对狭小,无目的的摆放将增加物品移动次数,取一个物品时跨过另一个的可能增加,增大染菌机会(一般的风是从上向下吹的)

2)操作幅度尽量小,移动速度适中,快则容易产生气流,慢泽延误时间,增加了暴露时间。不要对着操作区讲话或咳嗽

3)尽力独立完成,包括准备工具,配制试剂,除菌等过程,并不是不信任别人,只是需对自己更负责。

4)试剂单独使用。细胞较珍贵,胰酶、血清等试剂较昂贵,一旦污染只能弃去,损失很大,交叉使用危险较大。尤其初学者,只需分装出适量用于练习即可。

5)保持良好的环境。操作空间只是室内空间的一小部分,要保证经常打扫,经常灭菌。唇亡齿寒,在恶劣的大环境中,即使在百级洁净环境下也不保险,染菌迟早会发生的。

11、作者:liuhl

实验感受:我一直在养悬浮细胞,也积累了一些经验和教训。和大家分享一下:

1 无菌操作是一切技术的基础,切记此条。这方面大家说的很多,我就不重复了;

2 在细胞状态好时,乘胜追击,准备好一切所需要的细胞原料。例如:实验同时需要采用FCM检测药物干预后细胞周期的改变,需要做IHC,Werstern Blot,RT-PCR等时,可以现将细胞处理好后,根据不同的实验步骤,保存细胞标本,然后各个击破,这样可以减少实验时间。

如要收集不同浓度点和时间点的标本,细胞处理后,部分用来做流式测周期(固定那步可以放置-20度数日,待标本收集全后一起检测);部分用来细胞涂片(固定后,可以放-20度数月,本人曾放置3月没影响);

部分用来做Werstern Blot(将细胞离心呈粉末状置-80度保存,或者提取蛋白变性后保存,粉末保存时间可达2月);部分用于提取RNA时,可现加上Trizol混匀后,置-80度保存。原料准备好后,在根据自己的时间进行合理安排,多出时间查阅文献;

3 在进行每个实验时,一定要找到该实验的详细的Protocal,一步一步踏踏实实的完成,一般都会得到比较理想的结果。

12、作者:swan119

实验感受:两个月前我选取了cho细胞作为我实验对象,于是在朋友那里求得细胞株,兴奋的拿回来,准备大干一场,没有想到的是,细胞却越张越不象话,开始有很多细胞悬浮,又有很多的残渣,颗粒,细胞形态也千变万化,真的如万花筒一般,可怜我实验就老是拖着,实在无奈啊!

这时候,我就象抓狂一样,每天唠叨着我的细胞,天天想着该用什么办法使其恢复,开始的时候,我换了培养基,DMEM和F12一比一配比,加sigma非必须氨基酸,和丙酮酸钠,开始效果也很不哦理想,不过随着时间的推移,忽然有一天细胞居然奇迹般的变的光滑,颗粒明显减少,形态均一,透亮,贴壁良好,而且生长速度变快,幸福坏了!

我的感受是,你要象对待你女朋友一样对待你的细胞,你就会得到非常好的收获!

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