关键词: 淋巴细胞
来源: 丁香园
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第一就是要稀释。我们要留血浆(肝素钠抗凝的采血管采的血,5~6ml),所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水,一般3ml左右,混匀。第二,分离液不在乎体积有多少,主要是高度,如果离心管很粗的话(呵呵,挺吃亏的),就要多加一些,细一点的离心管就可以少加一些,一般高度要超过3cm。第三,看你要分离的血是什么来源的,成人外周血比较好分,脐血和胎盘血不好分。当然,发生溶血和凝血的话就更难分了。第四,血的保存很重要,采血后不要放到4度冰箱(当然更不能冻啦),常温,避光即可。从采血到分离不要超过12个小时,不然效果也不好。第五,就是离心的速度和时间。不同的离心机,肯定转速不一样的,我们实验室一般用水平离心机2500转,20分钟,基本上没有红细胞了,淋巴细胞也很多。这一条要自己多试试。第六,淋巴细胞分离液的保存不必放在4度,常温即可,无论是否开封了的。我们试过,分离液一放到4度后,无论复温的效果如何,分离的效果都没以前好。1.用0.85%生理盐水对倍稀释抗凝血液标本。2.取淋巴细胞分离液3-4ml于干净试管中。3.往淋巴细胞分离液上层缓缓加入2倍于分离液体积的稀释外周血量。4.2000-2500RPM转速离心15分钟。5.用吸管吸取中层白色浑浊液于eppendorf管-20℃保存待用。注意事项:
1、取血的质量很重要,分离界面清楚的总是血样质量好的(实验室人自己献的),我们用Hanks对倍稀释!分离液一般是稀释血量的1/2!2、离心时间很有关系各实验室离心机不同,自己摸索一下就好了!3、破碎红细胞我们用双蒸水少于一分钟。4、试管的干净程度也有关系的。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平?
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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科研汪也想有春天:告诉我你们的另一半都在哪里找的?
小伙伴们,请问你们的女(男)朋友是怎么找到的?(好给后来的朋友参考啊)是交友网站,还是七大姑八大姨介绍,还是同学自然成事?春天到了,我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧!
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细胞污染
悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!
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