细胞铺板:怎样才能铺得均匀
做cell biology实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。以前分享的一些技巧:1、一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再,继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆 . ...
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细胞的传代次数和间隔时间
问:复苏的肿瘤细胞传代多久后,弃之不用并解冻新的细胞?在传代的过程中, 有时细胞长得太满, 都开始死亡了才传,对细胞有什么不良的影响,有没有固定的传代间隔时间?答:rumex认为培养的代数因细胞不同而不同,肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题,但培养的不好就另说了,细胞数量达饱和密度后,细胞遂停止增殖,进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖,但仍有代谢活动,继而培养液中营养渐趋耗尽,代谢产物积累、pH降低。 ...
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Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞)的传代
Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞),是一种悬浮细胞。我的经验如下:1、培养液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,青霉素100IU/1ml,庆大霉素100IU/ml;2、培养条件:5%CO2,37度,30%湿度;3、细胞复苏:要快速将冻存管放入37度水中,不断轻轻摇晃,直到细胞完全溶解,加入10ml左右的培养液,800~1000rpm,10分钟离心,之后 ...
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菌体/细胞裂解的常用方法和配方汇总
由于上次求助无人回应,一气之下遍找资料,汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方,希望能对其它求助兄弟有所帮助。一、反复冻融法:1. 将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。2. 至少3次以上冻溶。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/pos ...
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