Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。(一) 原理:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077± ...
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离心分离的几种方法
离心分离的几种方法 、制备型超高速离心机的几种分离方法: A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种最常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。通常在第一次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到的上清液以更高速度离心,把所需的粒 ...
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基因组DNA提取方法
1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。3、重复2。4、加入5ml DNA提取缓冲液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混匀。5、加入25ul 蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h。6、用等体积的酚抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混 ...
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差速离心分离植物(动物)细胞核
线粒体和细胞核的制备与观察利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异,可采取分级差速离心的方法,将细胞核与线粒体逐级分离出来。(差速离心技术)线粒体是真核细胞特有的进行能量转换的重要细胞器。将动植物组织制成匀浆,在适当的悬浮介质中差速离心法可以分离细胞线粒体。在一定的离心场中(选用离心机的一定转速),球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀的悬浮介质中离心一定时间, ...
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