关键词: 蛋白印记 sds-page电泳
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① 10×Running Buffer
将144g Glycine、30.2g Tris Base、10g SDS溶解于1L双蒸水中.
使用时稀释10倍
② 1×Transfer Buffer
将3.03g Tris Base、14.4g Glycine溶解于500mL双蒸水中,加入200mL
Methanol,用双蒸水定容至1L
③ 牛奶封闭液
将2.0g牛奶溶解于20mLTBST中(对应于一块膜的量).
④ TBST
NaCl 150mM
Tris·Cl(pH7.6) 20mM
Tween-20 1‰(v/v)
⑤ TBS
⑥ 溶液A
ⅰ 0.1M Tris·Cl(pH9.0)
将3.026g Tris Base溶解于200mL双蒸水后调pH至9.0,双蒸水定容至250mL.
ⅱ 0.4mM PCA
将4.45mg PCA溶解于4mL 0.1M Tris·Cl(pH9.0)中.
ⅲ 100g/L luminol
将75mg luminol溶解于750uL DMSO 中.
ⅳ 于100mL 0.1M Tris·Cl(pH9.0)中加入4mL 0.4mM PCA和750uL 100g/L luminol.
⑦ 溶液B
于100mL 0.1M Tris·Cl(pH9.0)中加入200uL 30% H2O2.
⑧ 显影液 (商品化,按说明书配制)
⑨ 定影液 (商品化,按说明书配制)
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
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WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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