免疫沉淀反应(二)——琼脂扩散实验
琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时,便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时,便依各自扩散速度的差异,在适当部位形成独立的沉淀线,因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一 ...
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免疫共沉淀实验步骤
免疫共沉淀样品制备:1. 电转染CO-IP质粒入60 cm2培养瓶,表达48h;2. 吸干培液;3. 加入预冷的RIPA Buffer(0.5ml/60 cm2培养瓶),冰上孵育10~3 0min;4. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下,把悬液转到1.5EP管中;5. ...
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Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)实验指南及技术总结
ChIP是一项比较流行的研究转录因子( transcription factor TF)与启动子(promoter)相互结合的实验技术。由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法,所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。当用甲醛处理时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。 ...
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免疫共深沉(Co-IP)
一、原理:免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合 ...
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