酵母蛋白的提取方法
1 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml,酵母过夜培养,30℃,230rpm。2 测OD600 约1.0。3 100ml过夜培养物,1000g,离心,5min,4℃。4 弃上清,重悬于80ul抽提buffer:0.1M Tris-Cl(PH7.5),0.2M NaCl,0.01Mβ-ME,20%甘油,5mM EDTA,1mM PMSF。(100×):PMSF 0.1742g 溶于10ml ...
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实验室蛋白常用试剂配方
1、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、TBS:2.1 Tris缓冲液配方:(0.5 M pH7.6)Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g1N HCL约420ml双蒸水加至1000mlTris缓冲液配制方法:先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入H ...
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酶的分离纯化方法简介
酶的分离纯化方法简介生物细胞产生的酶有两类:一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶,称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶,如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶,就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高,容易得到;另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外,而在细胞内起催化作用,称为细胞内酶,如柠檬酸、肌苷酸、味精的发酵生产所进行的一系列化学反应,就是在多种酶催化下在细胞内进行的,在类酶在细 ...
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SWATH技术常见问题与解答
Q:SWATH技术的原理是什么?我为什么要做SWATH?A:SWATH采集模式是一种新型的MS/MS扫描技术,将扫描范围划分为以25Dalton为间隔的一系列区间,通过超高速扫描来获得扫描范围内全部离子的所有碎片信息,是MS/MSALL技术的扩展。SWATH技术可以用于蛋白质定量或蛋白复合体的鉴定。SWATH定量方法基于提取Transition峰面积计算出肽段含量,通过肽段含量推理出蛋白质含量。SWATH定量 ...
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