关键词: 增强敏感性 western-blot
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若目的条带未出现,或很淡,可试用以下方法增强发光强度:
1.用清水漂洗膜数分钟,重加发光液进行曝光,可延长曝光时间;
2.将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长,期间至少换 2 次液;
3.封闭 40~60 min;
4.一抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带;
5.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;
6.二抗杂交,37℃ 1 h;
7.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;
8.发光鉴定;
9.若条带仍未出现或很淡,可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;
10.三抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带。三抗即抗二抗的二抗,比如二抗用羊抗兔,此时三抗可以选择兔抗羊或鼠抗羊等;
11.PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;
12.发光鉴定。
注:一抗溶液中加入0.2% 叠氮钠后,可4℃存放至少 2 周,存放一个月我也用过,没问题,再长时间还没试过。
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
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WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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