关键词: 蛋白质 印迹 Western Blot
来源: 昊诺斯
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蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即 Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。
通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法(Western Blot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物 NC 膜或 PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 蛋白质印迹法(Western Blot)即是一种将电泳与 KIJSA 结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定 3 个阶段。蛋白质印迹法(Western Blot)结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
图示:蛋白质印迹法(Western Blot)实验流程图
蛋白质印迹法(Western Blot)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,「探针」是抗体,「显色」用标记的二抗。经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳) 分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。蛋白质印迹法(Western Blot)属于经验依赖性的多步骤实验,结果的优劣受到多个因素的影响,传统的手工操作容易引入误差,难以保证重复性。BlotCycler 是全自动化的蛋白质印迹法(Western Blot)洗液工作站,自动化完成封闭、孵育、清洗和一抗回收的一系列工作。BlotCycler 采用专利的流体清洗可以减少二抗在膜上的附着,降低背景,提高信噪比和相对灵敏度;自动化的操作流程避免了手工操作的误差,保证了批次内和批次间实验的重复性;高通量操作和多条件的设定可以辅助优化蛋白质印迹法(Western Blot)实验的条件。BlotCycler 全自动蛋白质印迹杂交系统性能特点:1.完全自动化:填充试剂后无需人工操作;2.专利的流体技术驱动液体,无需真空泵或空气压缩机等辅助设备;通量灵活:6 个样品盘(每侧 3 个),每个样品盘可使用不同的一抗/二抗,最多可一次处理 12 张膜;可选配不同大小的样品盘:10 × 8 cm,15 × 10 cm;自动回收一抗,可以反复使用 10 次;3.程序结束后可自动完成管路清洗,去除残余试剂;4.触摸屏程序编写,可设定多至 100 个步骤,每个步骤的参数可调;洗涤缓冲液可保留在样品盘内,保持膜的湿润;5.开放的系统设计,无需专用的试剂耗材;6.关键步骤和程序结束具有声音提示功能;7.结构紧凑,占用空间小,仅 30.48 × 30.48 cm。
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
42 评论
WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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