蛋白来源:肺脏
蛋白名称(可保密):ICAM-1
蛋白分子量:85~110 KD
WB用膜类型、孔径:0.22NC
转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流 300 mA
转膜时间:120 min
设备名字 Bio-Rad mini
一抗用的santa cruz 1 mL包装的。 比例调整到1:800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标,今年夏天做就不行了。
蛋白来源:成纤维细胞
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:16 KDa
WB用膜类型、孔径:0.2 um PVDF膜
转膜方式(恒压、恒流):0.2 A恒流
转膜时间:65 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad
蛋白来源:成纤维细胞
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:28 KDa
WB用膜类型、孔径:0.2 umPVDF膜
转膜方式(恒压、恒流):0.25 A恒流
转膜时间:60 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad
蛋白来源:人肿瘤细胞
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:80 KD
WB用膜类型、孔径:0.45 um PVDF膜
转膜方式(恒压、恒流):半干转移系统恒流,勿超过0.85 mA/cm2,同时转多张膜电流需累加(串联)
转膜时间:60-90 min
设备:Bio-Rad
其实有些东西并不是非常严格的,要转移的目的蛋白分子量小,那么转移的时间就短一些,反之,则长一点;蛋白量充足,可以多转一会,蛋白量较少,则要少转一下,免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。
蛋白来源:人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白
蛋白名称(可保密):***
蛋白分子量:17--116 kd
WB用膜类型、孔径:PVDF膜 0.45 um
转膜方式(恒压、恒流):恒流 200 mA
转膜时间:3 h
转膜设备:湿转 北京六一 24D mini
蛋白来源:CO COS7 293T
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:80 72 56 52 48 25 18KD
WB用膜类型、孔径:0.45 um PVDF膜
转膜方式(恒压、恒流):湿转 90 V 电流约为230--280 mA之间。两张膜串联叠加。
转膜时间:40 min
设备:Bio-Rad 法码西亚
蛋白来源:人肿瘤细胞
蛋白名称(可保密):磷酸化蛋白
蛋白分子量:30-60 KDa
WB用膜类型、孔径:pall NC膜 0.45 um
转膜方式(恒压、恒流):恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜
转膜时间:60-90 min
转膜设备: 北京六一 半干转
建议:转膜缓冲液用新鲜配制的,可先配成2倍的母液,转膜液的多少会影响电转的效率,一般将吸水纸润湿即可,不要和膜一起浸泡,这样效果很好。
蛋白来源:人肝癌肿瘤细胞
蛋白名称(可保密):notch
蛋白分子量:60-120 KDa
WB用膜类型、孔径:pall NC膜 0.45 um
转膜方式(恒压、恒流):恒流 0.3 A
转膜时间:-20度冰柜120 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
建议:转膜缓冲液用新鲜配制的,可先配成10倍或5倍的母液,保持低温是转膜效果的一个保证,这样效果很好。
蛋白来源:胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDa
WB用膜类型、孔径:NC膜 PALL
转膜方式(恒压、恒流):0.35 恒流
转膜时间:60 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad mini
转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多,一般加入SDS,时间延长结果会更好些。
由于,目前试验的蛋白就都不大,所以,我们都采用不加SDS的转缓液,跑出来的条带也很整齐、干净。
蛋白来源大肠癌205
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:92 kd,43 kd
WB用膜类型、孔径:0.45pvdf
转膜方式(恒压、恒流):恒压
转膜时间:90 min
转膜设备:湿转,天能。
蛋白来源:大鼠脑组织
蛋白名称(可保密):BDNF(28 KDa)、Bactin(42 KDa)、LaminB(72 KDa),以及磷酸化蛋白(保密 43 KDa)
WB用膜类型、孔径:PVDF(0.45)膜
转膜方式(恒压、恒流):300 mA 恒流
转膜时间:60 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad Mini
转膜缓冲液:25%甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量,而且使膜对蛋白的吸附效果较好,Marker转到膜上很鲜艳。 用立春红染色效果也很好。
蛋白来源:表达产物
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:29 KDa
WB用膜类型、孔径:PVDF
转膜方式(恒压、恒流):0.3 A 恒流
转膜时间:80 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
蛋白来源:cell lysate, culture medium
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:15-50 kD
WB用膜类型、孔径:NC,PVDF, 0.45 um
转膜方式(恒压、恒流):恒压, semi-dry
转膜时间:about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V, if not increase to 3-4 h。
转膜设备: Bio-Rad
蛋白来源:肺脏、肝脏等。
蛋白名称(可保密):actin
蛋白分子量:43 kD
WB用膜类型、孔径:NC膜PALL 0.22 um
转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流 200 mA
转膜时间:45~60 min
设备名字 Bio-Rad mini
用的santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般1:1000-1:3000左右,可稳定较长一段时间。
蛋白来源肺脏
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:19 kd,35 kd
WB用膜类型、孔径:0.2pvdf
转膜方式(恒压、恒流):恒流250
转膜时间:150 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad mini
蛋白来源:大鼠血管
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:140 kd
WB用膜类型、孔径:0.45pvdf
转膜方式(恒压、恒流):恒流,200 mA
转膜时间:210 min
转膜设备:湿转,北京六一
蛋白来源:心肌
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:90 kDa,70 kDa,12.6 kDa
WB用膜类型、孔径:NC
转膜方式(恒压、恒流):恒压
转膜时间:70 v 240 min,120 min,60 min
转膜设备:伯乐湿转
蛋白来源:脑
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:16 KD 60 KD
WB用膜类型、孔径:16的用0.22的PVDF,60的用0.45的NC
转膜方式(恒压、恒流):20 V
转膜时间:16的30 min,60的90 min
转膜设备:Bio-Rad 半干
蛋白来源:子宫内膜癌组织
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:156.8
WB用膜类型、孔径:NC膜
转膜方式(恒压、恒流):恒流400mA
转膜时间:90 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad
蛋白来源:真核表达
蛋白名称(可保密):(多种,30个以上)
蛋白分子量:40-200 kD
WB用膜类型、孔径:PVDF
转膜方式(恒压、恒流):恒压100 V(电流在280 mA至350 mA之间)
转膜时间:60 min(M<100kD),60-100min (100kD<M<200kD)
转膜设备:湿转
蛋白来源:大鼠肾脏
蛋白名称(可保密):保密
蛋白分子量:130 kD
WB用膜类型、孔径:0.45NC膜 PALL
转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流 350 mA
转膜时间:120min
设备名字 Bio-Rad mini
一抗用的sigma 羊抗大鼠,0.2 mL包装的,打折后价格3000多,有些贵哦。
比例调整到1:1500左右条带可,用BSA封闭。但是背景稍高。
蛋白来源:脑组织
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:38 KDa
WB用膜类型、孔径:PVDF膜,
转膜方式(恒压、恒流):80 v恒压
转膜时间:180 min
转膜设备:湿转 Bio-Rad mini
蛋白来源:真核表达
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量:约35 kD(双亚基)
WB用膜类型、孔径:0.22 um PVDF
转膜方式(恒压、恒流):恒流200 mA
转膜时间:60 min
转膜设备:湿转Bio-rad,天能,六一
转膜时间其实不需要那么长的,转膜没转上一般原因不在这里,可能是转膜液的原因:有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合,还原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合(这是我最近的经验教训),还有一抗的选择很重要,一定要选识别线性表位的抗体,才能用于做WB。
蛋白来源:细菌蛋白
蛋白名称(可保密):全部的可溶性蛋白
蛋白分子量:11-170 KD
WB用膜类型、孔径:0.45 NC
转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流300 mA
转膜时间:80 min
蛋白来源: 骨肉瘤细胞
蛋白名称(可保密):
蛋白分子量: 72 kDa
WB用膜类型、孔径: PVDF膜(0.45 um)
转膜方式(恒压、恒流): 半干转 恒流200 mA
转膜时间: 20-30 min
转膜设备:Bio-Rad 型号忘了,就是有4个插孔的电泳仪。
建议改进方向:低温很重要,新鲜的电转液也很重要。